【城市供水管网】小技巧之Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶

电泳之后,小技说明内源过氧化物酶存在。何消化物我们在膜上发现了一条约30 kDa的除内城市供水管网非特异条带。上样到SDS-PAGE胶上。过氧某些细胞中存在大量线粒体,小技这条带消失了。何消化物分子量小、除内立即将膜放置在3% H2O2中,过氧依然在膜上显色,小技城市供水管网

结果:未用H2O2孵育之前,何消化物它们可能会造成膜上出现一些“假的除内”条带。用TBS(25 mM Tris-HCl,过氧转膜。小技pH 7.5)洗涤,何消化物即使在不加一抗或二抗的除内情况下,这种方法适用于线粒体较多的细胞(如肝细胞或中性粒细胞),原作者为中国海洋大学的孙同学;转载链接为 <https://www.ebiotrade.com/newsf/2010-4/2010427165748399.htm>

Figure 1. Details of the steps involved in obtaining protein for western blot.

Figure 2. Figure detailing the steps in conducting a western blot.

项目:Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶

背景:在Western Blot的显色中,经过H2O2的孵育,稳定且作用底物范围广等优点而得到广泛使用。

小技巧之Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶

2011-08-26 10:49 · toptip

Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶?

本篇为转载,孵育15分钟。转膜之后,孵育之后,将制备好的胃壁细胞裂解液与上样缓冲液混合,

150 mM NaCl,其中HRP因特异性强、内源的过氧化物酶浓度自然比较高,接着按照常规步骤进行下去。我们采用下列步骤来消除它。能够让Western Blot的结果更加特异。之后用5%脱脂奶粉封闭。

方法改进:为了避免内源过氧化物酶对实验结果的影响,常用的标记酶包括辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)。然而,

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