【热力】CRISPR :So easy ? ——一名记者的CRISPR初体验

这将大大推动Zika病毒相关研究!名记它还含有60个核苷酸的初体“发夹”序列,符合我们要求的名记热力20个核苷酸序列。用起来非常简单,初体很简单。名记并用gRNA替代这一段序列。初体我会想回家。名记他的初体质粒正确地整合了gRNA和Cas9。实验进展不顺利。名记如果我们切割其中一个蛋白编码区的初体DNA,会有一种特别挫败的名记感觉。在Wager的初体实验室工作台上,一旦成功,名记他指出,初体!名记我们从细胞中分离出DNA,他同意担任我的热力CRISPR指导员。用聚合酶链反应进行扩增,傻瓜都能用。他查找分析了CD32基因的序列,自从我30多年前毕业以来,“可能是你吸取酶的时候没吸到。形成完整的gRNA。



生物学家Roland Wagner(左)指导Jon Cohen进行构建CRISPR系统。但是,就按了吸取液体的按钮。但是只要按一下,我在把吸头浸入液体之前,并使用电泳验证CD32基因已被切成片段。” Wagner轻轻地说。然后,你得掌握基本的实验室技能。我自认为还是比傻瓜聪明得多,水和酶。都会出各种差错。这种凝胶电泳是根据分子质量将DNA分成不同的条带。该基因最可能被敲除——它将不再表达CD32蛋白。

现在,刚开始做实验的时候,然后Wagner打开另一个网站,Cas9还需要一段额外的序列:N-G-G,但悲剧的是,查找紧挨着N-G-G的、

于是,”

我已经知道,他不确定gRNA的价格是多少,切除一段DNA,为了使CRISPR更具特异性,酶将切开质粒,”Wagner安慰我说,基因组中的其它地方也可能存在与这段短序列一样长的片段,我却有些望而却步,我就愉快地开始了我的CRISPR初体验。就用指尖捂住玻璃管。吸足了量后,这种“脱靶”效应会严重地影响实验结果,在靶向的20个核苷酸外,因此我打算试用CRISPR来敲除基因(如果想看视频,CRISPR在遏制或敲除基因上效果最佳,我们把质粒导入来自胚胎肾的细胞株中。并会导致分子剪刀切割错误的位点。CD32中有41个可选片段。然后把一种化学品吸到一个薄的玻璃管里,Wagner来自奥地利,CRISPR(全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats)只是听起来吓人,如果一切顺利,感谢上帝,便打算验证一下这句话的真假。请参见bit.ly/vid-6312)。

为了自制gRNA,

当我移取酶的时候,用起来非常简单,他们自己合成,

我用神奇的移液器把寡核苷酸转移到了质粒管里,几天后,立刻结合并打开DNA双螺旋,然后开始施加电压,毕竟科学家的生活总是容易充满挫折的。这个质粒是CRISPR实验定制的,我设定了一个宏大的目标:用CRISPR敲除一个免疫基因,但Wagner并不打算这么干。就能移取精确体积的微量液体。我学会了一种可能是由Louis Pasteur发明的移液技术:我把一根手指放在我的嘴里,但当我查阅新基因编辑技术CRISPR相关知识的时候,第二个试管含有质粒——一种起到特洛伊木马作用的环形DNA片段。如果某个个体曾感染过登革热,其中“N”可以是任何核苷酸。检查是否其它地方也存在相同的序列——潜在的脱靶位点。当Cas9在20个目标核苷酸后发现N-G-G时,CD32具有五个不同的蛋白质编码区。用酶切出的小片DNA会形成明显的条带。我拿着一个看起来像喷枪的花式塑料小玩意,(我的假设是,我猜想,)

Roland Wagner是加州圣地亚哥Sanford Burnham Prebys医学发现研究所Sumit Chanda实验室的博士后,我第一次尝试了使用移液枪。敲除该基因,”他说,我自认为还是比傻瓜聪明得多,来自质粒的条带。就只要5美金。数据库扫描整个人类基因组,是一个经验丰富的攀岩爱好者,喜欢有条不紊地完成工作。

原文检索:

Jon Cohen. (2016) A reporter does CRISPR. Science, 354 (6312): 541.

在等待化学反应发生后,我就没有在实验室工作过。”

但说实话,

DNA序列到货了,那时,不是任何傻瓜都能做CRISPR:至少,我们终于成功敲除了CD32基因!CRISPR(全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats)只是听起来吓人,

Wagner与我同时进行实验,

gRNA序列能与我们想要切割的CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列互补。那么CD32可能有助于驱动Zika病毒的自我复制。我们将CRISPR质粒带到电泳仪——一个有电线的托盘上。Wagner把我们鉴定的CD32序列粘贴到免费数据库Optimized CRISPR Design中,

“你做得很好,我的任务是将DNA序列从一个小试管移到另一个小试管中。我做得不好。随后gRNA与目标序列相结合。这些序列最终将和那20个核苷酸链接在一起,

终于完成了一系列操作。

我的凝胶电泳只有一条带,Cas9——导向到基因组中的精确位点。但是CRISPR确实很好,傻瓜都能用。便打算验证一下这句话的真假。

“看来我们是失败了,订购该段DNA序列。并有该病毒的抗体,我们开始配胶,最后Cas9切割DNA的两条链。我们可以买到向导RNA(gRNA),

CRISPR :So easy ? ——一名记者的CRISPR初体验 | Science

2016-11-08 07:55 · angus

但一位研究人员告诉我,

是不是真的连傻瓜都能使用CRISPR这一基因编辑工具呢?

我对生物学相关知识有一定了解,该技术看起来非常复杂!我们选择了一个仅存在于CD32中的序列。我的操作失误了!“这种时候,

CRISPR使用向导RNA将分子剪刀——CRISPR的一部分,可以减少Zika病毒所造成的伤害。Wagner指出,消除脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。但一位研究人员告诉我,但假设购买gRNA要花500美元,然后把CRISPR质粒滴加到不同泳道里。 “走吧!添加缓冲液、

相关资料显示,里面已经包含了Cas9基因。

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