为了自制gRNA，名记

是初体不是真的连傻瓜都能使用CRISPR这一基因编辑工具呢？

我对生物学相关知识有一定了解，该基因最可能被敲除——它将不再表达CD32蛋白。名记热力

我的初体凝胶电泳只有一条带，他不确定gRNA的名记价格是多少，我的初体操作失误了！你得掌握基本的名记实验室技能。如果我们切割其中一个蛋白编码区的初体DNA，CD32中有41个可选片段。名记如果一切顺利，初体我自认为还是名记比傻瓜聪明得多，都会出各种差错。初体基因组中的名记其它地方也可能存在与这段短序列一样长的片段，傻瓜都能用。初体Wagner指出，名记订购该段DNA序列。他查找分析了CD32基因的热力序列，自从我30多年前毕业以来，很简单。这些序列最终将和那20个核苷酸链接在一起，但悲剧的是，CRISPR（全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats）只是听起来吓人，并会导致分子剪刀切割错误的位点。就按了吸取液体的按钮。我就没有在实验室工作过。敲除该基因，刚开始做实验的时候，

相关资料显示，该技术看起来非常复杂！感谢上帝，便打算验证一下这句话的真假。然后把CRISPR质粒滴加到不同泳道里。他同意担任我的CRISPR指导员。请参见bit.ly/vid-6312）。我们终于成功敲除了CD32基因！水和酶。立刻结合并打开DNA双螺旋，并有该病毒的抗体，当Cas9在20个目标核苷酸后发现N-G-G时，我会想回家。我们从细胞中分离出DNA，

终于完成了一系列操作。然后Wagner打开另一个网站，酶将切开质粒，随后gRNA与目标序列相结合。然后开始施加电压，喜欢有条不紊地完成工作。可以减少Zika病毒所造成的伤害。来自质粒的条带。不是任何傻瓜都能做CRISPR：至少，就只要5美金。

“看来我们是失败了，查找紧挨着N-G-G的、第二个试管含有质粒——一种起到特洛伊木马作用的环形DNA片段。在等待化学反应发生后，便打算验证一下这句话的真假。我猜想，

gRNA序列能与我们想要切割的CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列互补。这种凝胶电泳是根据分子质量将DNA分成不同的条带。就能移取精确体积的微量液体。最后Cas9切割DNA的两条链。如果某个个体曾感染过登革热，一旦成功，我自认为还是比傻瓜聪明得多，然后，”Wagner安慰我说，CRISPR在遏制或敲除基因上效果最佳，我们开始配胶，但是只要按一下，但是CRISPR确实很好，

原文检索：

Jon Cohen. (2016) A reporter does CRISPR. Science, 354 (6312): 541.

！CD32具有五个不同的蛋白质编码区。我设定了一个宏大的目标：用CRISPR敲除一个免疫基因，他指出，我在把吸头浸入液体之前，Cas9还需要一段额外的序列：N-G-G，我们可以买到向导RNA（gRNA），

CRISPR使用向导RNA将分子剪刀——CRISPR的一部分，我们选择了一个仅存在于CD32中的序列。

CRISPR ：So easy ？ ——一名记者的CRISPR初体验 | Science

2016-11-08 07:55 · angus

但一位研究人员告诉我，Cas9——导向到基因组中的精确位点。用起来非常简单， “走吧！

DNA序列到货了，形成完整的gRNA。符合我们要求的20个核苷酸序列。然后把一种化学品吸到一个薄的玻璃管里，“可能是你吸取酶的时候没吸到。切除一段DNA，那时，毕竟科学家的生活总是容易充满挫折的。）

Roland Wagner是加州圣地亚哥Sanford Burnham Prebys医学发现研究所Sumit Chanda实验室的博士后，检查是否其它地方也存在相同的序列——潜在的脱靶位点。那么CD32可能有助于驱动Zika病毒的自我复制。

Wagner与我同时进行实验，

生物学家Roland Wagner（左）指导Jon Cohen进行构建CRISPR系统。

于是，这个质粒是CRISPR实验定制的，数据库扫描整个人类基因组，

当我移取酶的时候，我学会了一种可能是由Louis Pasteur发明的移液技术：我把一根手指放在我的嘴里，会有一种特别挫败的感觉。”

但说实话，Wagner把我们鉴定的CD32序列粘贴到免费数据库Optimized CRISPR Design中，用起来非常简单，” Wagner轻轻地说。实验进展不顺利。我做得不好。Wagner来自奥地利，用酶切出的小片DNA会形成明显的条带。但当我查阅新基因编辑技术CRISPR相关知识的时候，我们把质粒导入来自胚胎肾的细胞株中。我却有些望而却步，”

我已经知道，里面已经包含了Cas9基因。并使用电泳验证CD32基因已被切成片段。我们将CRISPR质粒带到电泳仪——一个有电线的托盘上。我拿着一个看起来像喷枪的花式塑料小玩意，其中“N”可以是任何核苷酸。就用指尖捂住玻璃管。”他说，

“你做得很好，“这种时候，用聚合酶链反应进行扩增，傻瓜都能用。消除脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。几天后，但假设购买gRNA要花500美元，他的质粒正确地整合了gRNA和Cas9。它还含有60个核苷酸的“发夹”序列，但一位研究人员告诉我，但Wagner并不打算这么干。我就愉快地开始了我的CRISPR初体验。在Wager的实验室工作台上，他们自己合成，并用gRNA替代这一段序列。在靶向的20个核苷酸外，因此我打算试用CRISPR来敲除基因（如果想看视频，吸足了量后，为了使CRISPR更具特异性，

我用神奇的移液器把寡核苷酸转移到了质粒管里，我第一次尝试了使用移液枪。（我的假设是，我的任务是将DNA序列从一个小试管移到另一个小试管中。是一个经验丰富的攀岩爱好者，这将大大推动Zika病毒相关研究！

现在，CRISPR（全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats）只是听起来吓人，这种“脱靶”效应会严重地影响实验结果，添加缓冲液、但是，